扫描电镜在观察生物样品时展现出其独特的观察优势,如多角度观察样品表面结构、无需切片、景深大、图像立体感强、放大倍数范围广以及在观察形貌的同时进行成分分析等。然而,生物样品含水状态直接观察会对扫描电镜产生不利影响,主要表现为水蒸气电离引起束流波动,导致图像模糊或无法成像;样品在高真空下形态易损伤,表面皱缩变形;样品挥发造成镜头、光阑等污染;以及灯丝氧化变质。
由于生物样品含水量高,二次电子产率低,导电性差,对热和电子束敏感,因此,大多数样品需要经过干燥处理才能进行镀金观察。干燥是扫描电镜生物样品制备中的关键环节,不当处理可能严重影响观察的清晰度与准确性。针对不同的生物样品,需选择合适的干燥方法。
常用干燥方法包括自然干燥法、烘干干燥法、临界点干燥法、冷冻干燥法和真空干燥法。自然干燥法适用于硬壳昆虫、木材等,烘干干燥法适用于不易变形且耐热的样品,临界点干燥法能有效消除液体表面张力,冷冻干燥法避免了气相和液相之间的损伤,真空干燥法在不进行冷冻处理的情况下,保留了冷冻干燥法的优点,适用于所有生物样品。
每种干燥方法都有其特点和适用范围。自然干燥法简单有效,但可能导致样品体积收缩;烘干干燥法干燥速度快,但可能造成样品变形或断裂;临界点干燥法能最大程度保存样品自然形态;冷冻干燥法不经过液相阶段,避免了损伤;真空干燥法操作简单,适用于所有生物样品。选择干燥方法时,应尽量选择能保持样品表面真实结构的方法,以还原样品表面细节。
在观察生物样品时,飞纳电镜的低真空模式和专用控温样品杯提供了额外的便利。低真空模式可以直接观察新鲜植物叶片、昆虫等生物样品,快速拍照,获得高质量图像,避免长时间曝光导致的问题。专用控温样品杯可以控制样品温度,减少电子束和真空度对样品的损害,适用于水凝胶、蛋白、藻类等含水较高的样品,保持原始形貌结构。
通过选择合适的干燥方法和利用电镜的特定功能,可以有效地制备出适用于扫描电镜观察的生物样品,从而获得清晰、准确的观察结果。
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