第二法福林酚法（Lowry法）
本法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质-铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下酷试剂易被蛋白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。
本法灵敏度高，测定范围通常可达20〜250µg。本法干 扰物质较多，对双缩脲反应产生干扰的离子，同样容易干扰福林-酚反应，且影响还要大。还原物质、酚类、枸橼酸、硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸、甘露醇、糖类、甘油等均有干扰作用。
试剂
碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g,加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合作为乙液。临用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。
对照品溶液的制备
除另有规定外，取牛血清白蛋白对照品，加水溶解并制成每1ml中含0. 2mg的溶液。
供试品溶液的制备
照各品种项下规定的方法制备（蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致）。
测定法
精密量取对照品溶液0.0ml，0.2ml、0. 4ml、0. 6ml、0. 8ml、1.0ml，分别置具塞试管中，各加水至1. 0ml，再分别加人碱性铜试液1.0ml ，摇匀，各加人福林酚试液〔取福林试液中的贮备液（2mol/L酸浓度）1→16〕4. 0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，照紫外-可见分光光度法（附录IV A)，在650nm的波长处测定吸光度；同时以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程。另精密量取供试品溶液适量，同法测定。从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得。
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回答时间：2024-04-24 08:29
