qPCR的相对定量计算方式，即2–∆∆Ct方法，由Kenneth Livak和Thomas Schmittgen于2001年提出并广泛应用。此方法在实时荧光定量PCR（qPCR）实验中，用于计算样品中特定基因相对于参考基因的相对表达量。
荧光定量PCR实验中，仪器会根据扩增产物的荧光信号达到设定阈值的循环数来记录Ct值。Ct值的高低反映了模板起始浓度的高低，浓度越高，Ct值越低。
“Delta”代表两个值之差。在2–∆∆Ct公式中，首先计算实验组和空白组的ΔCt值，再用实验组的ΔCt减去空白组的ΔCt得到ΔΔCt。其中，ΔCt由目的基因Ct值减去内参基因Ct值得到。内参基因，也称为管家基因，是一类在不同条件和时间下稳定高表达的基因。常见的内参基因包括β-Actin、GAPDH、18S、UBQ、EF-1α、TIP41等。
以具体实验为例，假设我们有一个内参基因和一个目的基因，实验中有两个重复Ct值（Ct1和Ct2），计算步骤如下：
1. 平均化技术重复的Ct值，求得每个样品的平均Ct值。
2. 计算每个样品的ΔCt值，即目的基因Ct值减去内参基因Ct值。
3. 计算ΔCt平均值作为参考。可以选择任意一组（如空白对照组）计算平均ΔCt值。
4. 计算ΔΔCt值，即将每个样品的ΔCt值与参考组的平均ΔCt值相减。
5. 计算2^-(∆∆Ct)值，代表目标基因相对于内参基因的相对表达量。
在统计分析时，直接使用2^-(∆∆Ct)值可能不满足正态分布，容易导致偏态问题，因此推荐使用对数转换进行修正。具体公式为：log( 2^-(∆∆Ct))。
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回答时间：2025-01-26 04:21
