microRNA sensors: microRNAsB表达位置哪位知道?谁能说几个好点的生物...

MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,是发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。随着miRNA调控基因表达的研究的逐步深入，将帮助我们理解高等真核生物的基因组的复杂性和复杂的基因表达调控网络。miRNA广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，其本身不具有开放阅读框(ORF)。成熟的miRNA，5′端有一个磷酸基团，3′端为羟基。编码miRNAs的基因最初产生一个长的pri-RNA分子，这种初期分子还必须被剪切成约70-90个碱基大小、具发夹结构单链RNA前体(pre-miRNA)并经过Dicer酶加工后生成。成熟的miRNA 5’端的磷酸基团和3端羟基则是它与相同长度的功能RNA降解片段的区分标志。miRNA 5'端第一个碱基对U(尿苷)有强烈的倾向性，而对G却排斥，但第二到第四个碱基缺乏U。一般来讲，除第四个碱基外，其他位置碱基通常都缺乏C。这些分子能够与那些和它的序列互补的mRNA分子相结合，有时候甚至可以与特定的DNA片断结合。这种结合的结果就是导致基因的沉默。这种方式是身体调节基因表达的一个重要策略。据推测，miRNA调节着人类三分之一的基因。 你可以去生物帮那里了解这类信息，在生物帮可了解最新国内外生物动态、科研资讯、产业资讯，观点评论和访问生物名人博客等。 please click to connect www.bio1000.com/zt/rna/221892.html .that can help you microRNA - 选择方法 1.pre-miRNA是最早采用的microRNA，拥有大量的成功报道。化学合成的pre-miRNA制备快捷，可以标记荧光等追踪。缺点是制备的RNA稳定性较差，而且，由于制备的microRNA较长，合成时RNA的错误难以避免(当合成RNA超过60bp时，出现一个碱基错误率约30%)，转录制备的pre-miRNA稳定性较好，但无flank结构，很少使用。质粒载体形式的pre-miRNA也因为发现microRNA的flank对于microRNA功能和测定非常重要，现已逐渐被pri-miRNA取代。 2.人工pri-miRNA效果较pre-miRNA好，也有足够多的成功使用的经验报道，但这种人工microRNA采用固定的mir155 flank，制备的microRNA功能不及天然原始microRNA，故也逐渐较少使用。 3.原始天然pri-miRNA克隆自天然文库的microRNA由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更好，是近来被首选方法。 4.pre-miRNA或pri-miRNA腺病毒：可以转染大多数绝细胞，产品质量可靠。缺点是腺病毒有一定的毒性，以往实验腺病毒毒性并未引起重视，但我们发现在microRNA实验中显得比较突出。另外，制备周期长，费用高也是不容忽视的缺点。 5.慢病毒microRNA：目前最好的microRNA实验产品，缺点是慢病毒自身的不足，即制备lenti-virus时，病毒的质量批间差异较大。 AAV、或retrovirus microRNA：与腺病毒和lenti-virus microRNA一样，具有病毒产品的优势与缺点。 There are several approaches that can be used to determine where specific microRNAs are expressed in a given tissue. Northern blots, microRNA microarrays, and in situ methods such as sensors. In the figure above, a transgenic mouse was created where the lacZ gene is expressed throughout all tissues in the animal, thus the embryo stains almost entirely blue (see above, c). If specific microRNA target sites are placed in the 3"-UTR of the lacZ gene (see above, b), no blue stain will occur if that specific microRNA is present in the same tissue (see below) read the paper by Mansfield et al. .The staining pattern in the mouse embryos above is Hox-like because the miR-10 and miR-196 Hox genes are located in Hox-clusters and are expressed in a manner that is overall consistent with their relative locations in the Hox cluster (see figure below). We use sensors to detect the specific expression of microRNAs in tissues, and are developing newer approaches to follow expression in more sensitive ways-- even in adult mouse tissues. We hope these new tools will give us insight into the function of microRNAs, and perhaps their potential interplay in human diseases such as cancer.

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