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【罗工宝典第18式】BrdU的检测攻略

提问网友 发布时间:2025-03-17 22:06
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热心网友 回答时间:2025-03-26 08:58

在生物学研究中,BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)的检测被广泛用于评估细胞增殖能力,特别是体内外实验中。BrdU作为DNA合成期S期的胸腺嘧啶核苷替代品,通过特异性掺入细胞DNA,成为研究细胞周期、细胞增殖和DNA合成的重要工具。本文将详细介绍BrdU原理、应用方法及实验操作流程,包括体外和体内实验,并概述与其他细胞增殖常用试剂的对比。


**BrdU原理及其应用方法**


**1. 原理**:BrdU在DNA合成过程中,由于其结构与胸腺嘧啶核苷相似,能够在S期选择性地替代胸腺嘧啶核苷掺入到DNA双链中。这种掺入是可逆的,但若细胞继续分裂,BrdU在新合成的DNA链上保持稳定,最终在子代细胞的DNA中长期存留。


**2. 应用方法**:通过BrdU掺入后的DNA,可以采用免疫学方法、流式细胞术、酶标仪检测等手段,分析DNA中BrdU的含量,进而评估细胞的增殖能力,或作为示踪标记研究外源细胞在体内迁移和分布。


**实验操作流程**(体外实验)**:**



在细胞培养液中加入10μM的BrdU(细胞密度不超过2×106 cells/mL),培养至所需时间(一般为30-60分钟)。
(可选)进行表面染色,加入表面抗体,室温孵育15分钟后离心洗涤。
使用固定液重悬细胞,室温或冰上孵育15分钟至30分钟后离心洗涤。
使用渗透染色液重悬并冰上孵育10分钟后离心洗涤。
重复固定步骤,再进行一次细胞洗涤。
添加DNase消化细胞DNA,37℃孵育1小时后离心洗涤。
用抗体缓冲液(含荧光标记的BrdU抗体)孵育细胞20分钟后离心洗涤。
(可选)染色总DNA,用于细胞周期分析。
重悬细胞,准备上机检测。

**结果参考**:参考文献提供了实验结果图,展示BrdU掺入对细胞周期和增殖的影响。


**体内实验**:



腹腔注射BrdU(10 mg/mL),1小时后即可检测到BrdU在胸腺和骨髓中的掺入。
在饮用水中添加BrdU(0.8 mg/mL),确保新鲜配制并每日更换。

**注意事项**:



BrdU需避光处理,防止光分解。
BrdU不稳定,应现配现用。
样品在抗体孵育前需充分洗涤,避免残留酶或酸影响检测结果。
BrdU用于短时检测,避免超过一个细胞周期。

**参考文献**:提供了相关研究论文,详细介绍了BrdU在不同实验中的应用和结果。


本文综合了BrdU的原理、应用、实验操作流程及注意事项,旨在为细胞增殖研究提供有力的工具和方法。通过BrdU的检测,研究人员能够深入理解细胞周期调控、细胞增殖机制及其在疾病发展中的作用。

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