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SDS碱裂解法提取质粒DNA中溶液1的成分及作用是什么？170

提问网友发布时间：2023-10-20 06:43

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共3个回答

热心网友回答时间：2024-05-18 03:46

溶液Ⅰ 50mM 葡萄糖 / 10mM EDTA / 25mM Tris-HCl，pH=8.0

葡萄糖增稠，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA 抑制DNase的活性。这一步溶液中还可以加入RNase，不受EDTA影响，并且可以在后续步骤中被除去

溶液Ⅱ 0.2M NaOH / 1% SDS

破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。

溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 / 2M 醋酸

这一步的K置换了SDS（十二烷基磺酸钠）中的Na，得到PDS（十二烷基磺酸钾）沉淀；SDS易与蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了，同时基因组DNA也被PDS共沉淀

热心网友回答时间：2024-05-18 03:47

溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液，没有什么实际意义，可以不要。
溶液2是碱液，目的在彻底破坏细胞膜，释放核酸。
溶液3是酸性钾盐溶液，目的是中和碱性并且沉淀SDS同时被沉淀的还有蛋白和大片段线性DNA。
我记得就是这样了，因为没有附加分所以就不去查证了，楼主姑妄听之。

热心网友回答时间：2024-05-18 03:47

I，含有EDTA，利于悬浮，可以说是提高得率的一步。有时候也在I中加 RNase，去除细胞中的RNA，一般4°保存。
Ⅱ，破解细胞的，完了之后一般会变粘稠，这就是遗传物质出来了，
Ⅲ，是来沉淀蛋白质的

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